[考点]
体外受精和胚胎移植,限制性内切核酸酶,DNA连接酶,基因工程的操作过程综合,
[答案]
(1)BamHⅠ、HindⅢ;DNA连接;磷酸二酯键
(2)基因Leu、基因GFP;不含有亮氨酸;非目的基因片段
(3)不需要;内细胞团
[解析]
解:(1)过程②为对目的基因进行切割,结合切割出的黏性末端GATC、AGCT可知,需要的限制性内切核酸酶是BamHⅠ、HindⅢ;B与切割后的质粒S具有相同的黏性末端,可以用DNA连接酶连接形成磷酸二酯键,构建重组质粒T。
(2)基因GFP控制合成绿色荧光蛋白、Leu通过控制相关酶的合成而控制亮氨酸的合成,两者都为标记基因,有助于重组质粒的筛选。为达到筛选目的,培养基的营养成分中特殊之处是不含有亮氨酸,这样能生长的菌株即为含有普通质粒和重组质粒的菌株,重组质粒GFP基因被破坏,即能在缺乏亮氨酸的培养基上生长又不能表现为绿色的即为含重组质粒的菌株。以目的基因片段为模板的组别作为阳性对照组,若实验组导入成功,则也会出现与阳性对照组一样的条带,以非目的基因片段为模板的组别作为阴性对照组,表明电泳的准确性。
(3)胚胎成纤维细胞抑制分化,过程⑧为早期胚胎培养,需要分化,不需要添加胚胎成纤维细胞;早期胚胎的囊胚期的内细胞团细胞将发育成完整转基因羊个体。
故答案为:
(1)BamHⅠ、HindⅢ;DNA连接;磷酸二酯键
(2)基因Leu、基因GFP;不含有亮氨酸;非目的基因片段
(3)不需要;内细胞团
[点评]
本题考查了"体外受精和胚胎移植,限制性内切核酸酶,DNA连接酶,基因工程的操作过程综合,",属于"综合题",熟悉题型是解题的关键。