[考点]
单克隆抗体及其应用,基因工程的操作过程综合,DNA片段的扩增与电泳鉴定,
[答案]
(1)目的基因 基因文库 PCR dNTP(四种脱氧核苷三磷酸)
(2)CaCl2 感受态
(3)HAT 未融合细胞 同种核融合细胞
(4)pH、温度、溶解氧 动物血清 细胞系 抗原—抗体杂交 过滤、层析、离心、离子交换、萃取
[解析]
解:(1)分析题意,蛋白A的基因为目的基因,可从基因文库中获取目的基因,因此获取该基因的常用方法是先建立基因文库;PCR是一项体外扩增DNA的技术,常用PCR技术对目的基因进行扩增,dNTP(四种脱氧核苷三磷酸)既能为DNA复制提供能量,又能为PCR技术提供原料。
(2)将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法,将工程菌放在低温、低浓度的CaCl2溶液中,使细胞膜的通透性改变,成为感受态细胞,该状态为容易从周围环境中吸收外源DNA的状态,进而可提高转化效率。
(3)在杂交瘤细胞筛选过程中,常使用特定的选择培养基(如HAT培养基),该培养基对未融合细胞和同种核融合细胞两类细胞的存活和繁殖具有抑制作用,只有杂交瘤细胞可以正常增殖,因此该选择培养基只允许杂交瘤细胞正常生长,从而筛选出杂交瘤细胞。
(4)在发酵过程中,要及时添加必需的营养组分,要严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件,因此,特定杂交瘤细胞培养常用搅拌式发酵罐,培养时需注意控制如pH、温度、溶解氧等条件;在动物细胞培养的过程中,通常需加入动物血清、血浆等天然物质;抗原与抗体的结合具有特异性,发酵罐内细胞增殖形成细胞系,其分泌的抗体可利用抗原—抗体杂交筛选;罐内上清液中单克隆抗体含少量杂质,可采用过滤、层析、离心、离子交换、萃取等方法纯化。
故答案为:
(1)目的基因 基因文库 PCR dNTP(四种脱氧核苷三磷酸)
(2)CaCl2 感受态
(3)HAT 未融合细胞 同种核融合细胞
(4)pH、温度、溶解氧 动物血清 细胞系 抗原—抗体杂交 过滤、层析、离心、离子交换、萃取
[点评]
本题考查了"单克隆抗体及其应用,基因工程的操作过程综合,DNA片段的扩增与电泳鉴定,",属于"难典题",熟悉题型是解题的关键。