[答案]
（1）碱基互补配对 磷酸二酯键 防止外源基因插入和表达，保证原核生物自身安全和遗传稳定
（2）抗生素G418和嘌呤霉素 95%空气加5%CO2的混合气体 同时调控（或表达）
（3）加入的特定引物能与总cDNA中TMS5基因特异性结合 不一定，转化是指目的基因成功导入受体细胞并稳定存在和表达，仅提取到TMS5基因不能说明它能否正常表达
[解析]
解：（1）图1为CRISPR/Cas9系统作用示意图，向导RNA与DNA根据碱基互补配对原则结合；Cas9蛋白可催化磷酸二酯键水解，剪切特定DNA片段。CRISPR/Cas9系统广泛存在于原核生物中，细菌这种清除入侵病毒DNA的生理意义是防止外源基因插入并表达，保证了细菌遗传性状的稳定。
（2）分析图2可知：将OCT4、KLF4、MYC及SOX2四个基因的sgRNA序列串联成的sgRNA质粒和dCas9﹣SAM质粒与磷脂等混合（形成包埋DNA脂质体结构），将脂质体加入到细胞系MCF7的细胞培养皿中，若外源DNA导入细胞中，则细胞中有G418抗性基因和嘌呤霉素抗性基因，24h后通过添加抗生素G418和嘌呤霉素筛选并进行单细胞培养即可得到基因编辑后的细胞。动物细胞培养过程须在37°C，气体环境为95%空气加5%CO2的混合气体的细胞培养箱中进行。该实验通过4种sgRNA对MCF7细胞进行编辑，可通过调控启动子序列等调控基因的表达，进而可实现多基因同时调控的目的。
（3）从水稻组织中提取总RNA，经逆转录获得总cDNA，因为加入的特定引物能与总cDNA中TMS5基因特异性结合，可通过PCR技术准确扩增出TMS5基因。转化是指目的基因成功导入受体细胞并稳定存在和表达，仅提取到TMS5基因不能说明它能否正常表达。在筛选出成功导入TMS5基因表达载体的水稻愈伤组织后，经多代培养仍能提取出TMS5基因，不能说明TMS5基因一定成功转化。
故答案为：
（1）碱基互补配对 磷酸二酯键 防止外源基因插入和表达，保证原核生物自身安全和遗传稳定
（2）抗生素G418和嘌呤霉素 95%空气加5%CO2的混合气体 同时调控（或表达）
（3）加入的特定引物能与总cDNA中TMS5基因特异性结合 不一定，转化是指目的基因成功导入受体细胞并稳定存在和表达，仅提取到TMS5基因不能说明它能否正常表达
[点评]
本题考查了"基因工程的操作过程综合，"，属于"常考题"，熟悉题型是解题的关键。
如图为大肠杆菌及载体质粒的结构模式图，据图回答下列问题。
，则与之连接的目的基因的切割末端（用同种限制酶切割产生）应为 ；可使用 把质粒和目的基因连接在一起。
纠错
收藏
下载
相似
组卷
解析